Expression of the E21b, E21d, and E21e antigenic viral protein variants of bovine viral diarrhea in the CHO cell line / Jorge Ernesto Simón Tanquero ; tutor Nelson Francisco Santiago Vispo

Por: Colaborador(es): Tipo de material: TextoTextoIdioma: Inglés Idioma del resumen: Español Fecha de copyright: Urcuquí, 2020Descripción: 42 hojas : ilustraciones (algunas a color) ; 30 cm + 1 CD-ROMTema(s): Recursos en línea: Nota de disertación: Trabajo de integración curricular (Biólogo/a). Universidad de Investigación de Tecnología Experimental Yachay. Urcuquí, 2020 Resumen: El virus de la Diarrea Viral Bovina, del género Pestivirus, es un patógeno viral que afecta las vías respiratorias y tasas de fertilidad del ganado a nivel mundial generando substanciales pérdidas económicas para la industria ganadera. Dado el irregular desempeño de las vacunas comerciales disponibles en Chile contra la Diarrea Viral Bovina, y la fuerte inducción de respuesta inmune de la proteína de envoltura E2 de la DVB, nosotros expresamos y caracterizamos tres variantes en un sistema recombinante, de la forma truncada de E2 como base para candidatos de vacuna. Dos vectores de expresión mamífera (pCI-Neo) fueron usados para expresar las variantes de menor tamaño de la glicoproteína principal de envoltura E2, identificadas como E21b, E21d y E21e, en una línea productora estable de células de ovario de hámster chino. Estos genotipos recombinantes expresados compartían características similares electroforéticas y serológicas a las de su contraparte viral. Los vectores plasmídicos contenían una proteína fluorescente (EFGP) y un casete de expresión de resistencia a la neomicina fosfotransferasa, confiriendo resistencia a la Geneticina, para conducir la expresión del cultivo y permitir la selección de células conteniendo el plásmido. Mediante análisis por SDS-PAGE y Western Blot fueron caracterizadas las proteínas blanco expresadas y se seleccionaron las líneas celulares más productoras. Las tres variantes de E2 obtenidas fueron purificadas simultáneamente en un solo paso hasta pureza moderada a través de una cromatografía de Ni-Sepharose, obteniéndose inmunógenos listos para ser utilizadas en pruebas serológicas in vivo.
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Trabajo de integración curricular (Biólogo/a). Universidad de Investigación de Tecnología Experimental Yachay. Urcuquí, 2020

Incluye referencias bibliográficas (páginas 31-35)

Trabajo de integración curricular con acceso abierto

Texto (Hypertexto links)

El virus de la Diarrea Viral Bovina, del género Pestivirus, es un patógeno viral que afecta las vías respiratorias y tasas de fertilidad del ganado a nivel mundial generando substanciales pérdidas económicas para la industria ganadera. Dado el irregular desempeño de las vacunas comerciales disponibles en Chile contra la Diarrea Viral Bovina, y la fuerte inducción de respuesta inmune de la proteína de envoltura E2 de la DVB, nosotros expresamos y caracterizamos tres variantes en un sistema recombinante, de la forma truncada de E2 como base para candidatos de vacuna. Dos vectores de expresión mamífera (pCI-Neo) fueron usados para expresar las variantes de menor tamaño de la glicoproteína principal de envoltura E2, identificadas como E21b, E21d y E21e, en una línea productora estable de células de ovario de hámster chino. Estos genotipos recombinantes expresados compartían características similares electroforéticas y serológicas a las de su contraparte viral. Los vectores plasmídicos contenían una proteína fluorescente (EFGP) y un casete de expresión de resistencia a la neomicina fosfotransferasa, confiriendo resistencia a la Geneticina, para conducir la expresión del cultivo y permitir la selección de células conteniendo el plásmido. Mediante análisis por SDS-PAGE y Western Blot fueron caracterizadas las proteínas blanco expresadas y se seleccionaron las líneas celulares más productoras. Las tres variantes de E2 obtenidas fueron purificadas simultáneamente en un solo paso hasta pureza moderada a través de una cromatografía de Ni-Sepharose, obteniéndose inmunógenos listos para ser utilizadas en pruebas serológicas in vivo.

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